Naučite kako napraviti TAE Buffer u nekoliko koraka

Ovaj Buffer koristi se za proučavanje DNK pokreta

TAE pufer je rastvor koji se sastoji od baze Tris, sirćetne kiseline i EDTA (Tris-acetate-EDTA). Istorijski je najčešći bafer koji se koristi za elektroforezu agaroznog gela u analizi DNK proizvoda koji proizlaze iz PCR amplifikacije, protokola za prečišćavanje DNK ili eksperimenata kloniranja DNK .

Ovaj bafer ima nisku jonsku jačinu i nizak kapacitet pufra. Najprikladnije je za elektroforezu velikih (> 20 kb) komada DNK-a i moraće da se često zamenjuje ili recirkuliše duže (> 4 h) gelova.

Imajući to u vidu, možda ćete želeti razmotriti nekoliko serija pufera.

S obzirom na to da je pufer jednostavan za korišćenje, a koraci se mogu brzo izvoditi, čineći više od jedne serije istovremeno ne treba posebno dugo vremena ili je teško izvući. Koristeći dole navedena uputstva, potrebno je samo 30 minuta da napravite TAE bafer. Evo kako:

Pripremite zalihu EDTA

Predodređeno je EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) rastvor. EDTA ne ide u potpunosti u rastvor dok se pH ne podesi na oko 8,0. Za stock-rastvor od 500 mililitara 0,5 M EDTA, težak 93,05 grama EDTA dinatrijeve soli (FW = 372,2). Rastvoriti u 400 mililitara deionizirane vode i prilagoditi pH natrijum hidroksidom (NaOH). Rastvor dovršite do konačnog volumena od 500 mililitara.

Bičirajte osnovno rešenje TAE-a

Napraviti koncentrovani (50x) osnovni rastvor TAE vaganjem 242 grama baze Tris (FW = 121.14) i rastvaranjem u oko 750 mililitara deionizirane vode.

Pažljivo dodajte 57.1 mililitara glacijalne kiseline i 100 mililitara 0.5 M EDTA (pH 8.0). Nakon toga, prilagodite rastvor na završni volumen od 1 litra. Ovaj osnovni rastvor se može čuvati na sobnoj temperaturi. PH ovog pufera nije podešen i treba da bude oko 8,5.

Pripremite radno rešenje TAE-a

Radni rastvor 1x TAE pufera se proizvodi jednostavnim razređivanjem osnovnog rastvora za 50x u deionizovanoj vodi.

Konačne koncentracije rastvora su 40 mM. Tris-acetat i 1 mM EDTA. Bufer je sada spreman za upotrebu u pokretanju agaroznog gela.

Šta vam je potrebno za pufer

Budući da pravljenje bafera TAE zahteva samo brz i jednostavan skup instrukcija, broj potrebnih materijala nije preteran. Potrebna vam je samo EDTA dinatrijumska so, baza Tris i glacijalna sirćetna kiselina.

Izrada bafera takođe zahteva pH metre i standarde za kalibraciju, po potrebi. Takođe će vam trebati 600 mililitara i 1500 mililitara čaša ili boca, kao i diplomirani cilindri. Konačno, trebaće vam deionizovana voda, mešati šipke i mešati ploče.

Zavijanje

Gde nameravate napraviti pufer - na školskoj lokaciji, na radnom mestu ili na nekoj drugoj lokaciji, kao što je vaš dom? Proverite inventar pre nego što počnete da se uverite da imate sve navedene materijale za TAE pufer.

Ako ne želite da plaćate materijale, preporučujemo vam da napravite bafer izvan vašeg doma. Možete jednostavno naručiti materijale koji su vam potrebni na mreži ili posetite specijalnu prodavnicu za njih.