Ovi baferi mogu se koristiti za biološke primjene pri neutralnom pH vrednosti
Tri pKa vrijednosti za fosfornu kiselinu (iz Priručnika hemije i fizike CRC-a) su 2.16, 7.21 i 12.32. Mononatrijum-fosfat i njegova konjugirana baza, dinatrijum-fosfat se obično koriste za stvaranje bafera pH vrednosti oko 7, za biološke primjene, kao što je prikazano ovde.
Izrada ovog pufera je malo teže nego što se pravi TAE i TBE odbojnici. Međutim, nije izuzetno teško. Jednostavno prosječno. Trebalo bi otprilike 10 minuta da napravite ovaj bafer. Evo kako.
1. Odlučite o karakteristikama Buffera
Pre nego što napravite pufer, prvo morate znati koju molarnost želite, kakav će volumen biti i koji je željeni pH. Većina pufera najbolje funkcionišu pri koncentracijama između 0,1 M i 10 M. pH mora biti u okviru 1 pH jedinice bazne kiseline / konjugata pKa. Za jednostavnost, ovaj uzorak će biti za 1 litar pufera.
2. Odredite odnos kiseline na bazu
Koristite jednačinu Henderson-Hasselbalch (dole) da biste utvrdili koji je odnos kiseline i baze potreban da biste napravili pufer od željenog pH-a. Koristite vrednost pKa koja je najbliža željenom pH-u, a odnos će se odnositi na konjugatni par kiseline, koji odgovara onom pKa.
HH Jednačina: pH = pKa + log ([Baza] / [kiselina])
Za pufer od pH 6,9, [Baza] / [kiselina] = 0,4898
Zamenjuje se za [Acid] i Solve for [Base]
Željeni molar pufera je suma [Acid] + [Base].
Za 1 M pufer, [Base] + [Acid] = 1 i [Base] = 1 - [Acid]
Zamenjujući ovo u odnosu jednačine, iz koraka 2 dobijate:
[Kiselina] = 0,6712 mol / L
Rešite za [kiselinu]
Koristeći jednačinu: [Base] = 1 - [Acid], možete izračunati da:
[Baza] = 0,3288 molova / l
3. Mešajte kiselu i konjugovanu bazu
Nakon što ste koristili Henderson-Hasselbalch jednačinu kako biste izračunali koji odnos kiseline i baze je potreban za vaš pufer, pripremite samo ispod 1 litra rastvora koristeći tačne količine mononatrijevog fosfata i dinatrijum fosfata.
4. Proverite pH
Koristite pH sondu da biste potvrdili da se dostigne tačan pH za pufer. Prilagodite malo po potrebi, koristeći fosfornu kiselinu ili natrijum hidroksid (NaOH).
5. Ispravite količinu
Kada se dostigne željeni pH, dovedite zapreminu pufera na 1 litar. Zatim razblažite bafer po želji. Ovaj isti bafer može se razblažiti da bi se stvorili puferi od 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M ili bilo šta između.
6. Saveti za Buffer
Zapamtite da se pKa ne može lako mjeriti do tačne vrijednosti. Nekoliko različite vrednosti mogu biti dostupne u literaturi iz različitih izvora.
7. Šta vam je potrebno
Da biste napravili pufer, trebaju vam tri supstance, dok su ostali materijali oprema. Supstance su monosodijum-fosfat, dinatrijum-fosfat i fosforna kiselina ili natrijum-hidroksid, kako bi se prilagodio pH.
Takođe će vam trebati pH metar i sonda i odgovarajući labware. Ovo uključuje volumetrijsku bušilicu, završne cilindre, čaše i šipke za mešanje.
Na kraju, potrebna vam je grejna ploča za mešanje.