Kako napraviti ovaj imunohistokemijski bubreg za bojenje
Fosfatni pufer (PBS) je puferno rešenje koje se obično koristi za imunohistohemijsku (IHC) bojenje i često se koristi u biološkim istraživanjima. PBS je vodeni rastvor soli koji sadrži natrijum hidrogenfosfat, natrijum hlorid i, u nekim slučajevima, kalijum hlorid i kalijum dihidrogen fosfat.
Imunohistokemijska bojenja
Imunohistokemija se odnosi na proces otkrivanja antigena kao što su proteini u ćelijama tkivnog dela koristeći princip antitela koji se specifično vezuju za antigene u biološkim tkivima.
Imunofluorescentno bojenje je prvi imunohistokemijski metod za bojenje.
Antigeni postaju vidljivi kada su konjugovani antitelima koristeći fluorescentne boje zbog reakcije vezivanja antigena i antitela. Ovaj proces se javlja kada je aktiviran uzbudljivim svetlom određene talasne dužine pod fluorescentnim mikroskopom.
Osmolarnost i jonske koncentracije rešenja odgovaraju ljudskom tijelu - one su izotonične.
Recept za PBS
Možete pripremiti PBS na više načina. Postoji više formula. Neki od njih ne sadrže kalijum, dok drugi sadrže kalcijum ili magnezijum .
Ovaj recept je relativno lagan. To je za 10X PBS stock solution (0,1M). Međutim, takođe možete napraviti 1X stock rešenje ili početi sa ovom 10X receptom i razblažiti ga na 1X.
Ceo proces traje oko 10 minuta.
Obezbeđena je i mogućnost dodavanja Tween.
Šta ćete trebati napraviti PBS Buffer
- Monobazni natrijum-fosfat (bezvodni)
- Dibazni natrijum fosfat (bezvodni)
- Natrijum hlorida
- Skali i vaganje čamaca
- Magnetna mešalica i mešalo
- PH sonda koja je kalibrirana i odgovarajuća rešenja za podešavanje pH vrednosti
- 1L volumetrijska kolica
- Tween 20 (opcionalno)
Kako napraviti fosfatni pufni salin (PBS)
Izmeriti 10,9 g anhidrovanog natrijum fosfatnog dibazika (Na2HPO4), 3,2 g anhidrovanog natrijum fosfata monobaznog (NaH2PO4) i 90 g natrijum hlorida (NaCl).
Raspustite se u samo 1L destilovane vode.
Podesite pH na 7.4 i rastvor dovršite do konačnog volumena od 1L.
Razblažite 10X pre upotrebe i prilagodite pH ako je potrebno.
Možete napraviti PBS rastvor koji sadrži 0,5% Tween 20 dodavanjem 5mL Tween 20 u 1L rastvor.
Saveti za pravljenje PBS Buffera
Čuvati pufer na sobnoj temperaturi nakon što ste napravili PBS rešenje.
Ne-anhidrovani reagensi mogu biti zamenjeni, ali ćete morati da preračunate odgovarajuću masu svake da biste primenili molekule dodate vode.
Upotreba fosfatnog puferskog salina (PBS)
Fosfatni pufer sa puno koristi, jer je izotoničan i netoksičan za većinu ćelija. Može se koristiti za razblaživanje supstanci i često se koristi za ispiranje kontejnera ćelija. PBS se može koristiti kao razređivač u različitim metodama za sušenje biomolekula, jer će molekuli vode unutar njega biti strukturirani oko supstance-proteina, na primer. Ona će biti "osušena" i imobilisana na čvrstu površinu.
PH ostaje stabilan i konzistentan da spreči uništavanje ćelija.
Tanak sloj vode koji se vezuje za supstancu sprečava denaturaciju ili druge konformacijske promene. Karbonatni baferi mogu se koristiti za istu svrhu, ali sa manje efektivnosti.
PBS se takođe može koristiti za uzimanje referentnog spektra prilikom merenja adsorpcije proteina u elipsometriji.