Merenje kinetike enzima
Kao malo pozadine, enzimi su proteini koji deluju kao katalizatori u smanjivanju količine energije aktivacije za reakciju. Energija aktivacije je energija koja je potrebna da se reakcije "započnu" jer se mnoge reakcije ne pojavljuju veoma brzo (ili se uopšte pojavljuju) ako su termodinamski moguće.
Enzimi katalizuju specifične reakcije na određenoj lokaciji (poznate kao aktivna lokacija) gde se reaktanti vezuju i reaguju na stvaranje proizvoda. Podloge imaju aktivne lokacije koje su specifične samo za njih, tako da se na drugoj lokaciji ne vezuju ni druge reakcije. Kao brava i ključ, svaki enzim će katalizirati samo jednu specifičnu reakciju (uz izuzetke).
Specifična aktivnost se koristi u metodama izolacije proteina kako bi se naznačio procenat prečišćavanja. Važno je znati ovu jedinicu kada kupujete enzime kako biste precizno pokazali koliko čiste enzime dobijate.
Prilikom merenja kinetike enzima (brzina reakcije enzima sa supstratom - ili površinom), specifična aktivnost je definirana kao količina substrata koji se enzima konvertuje (reakcije katalizovane), po mg proteina u enzimskom preparatu, po jedinici vremena.
Primer konkretne aktivnosti bio bi:
- Specifična aktivnost izolovanog enzima merena je na 150 umol / min / mg proteina pre prečišćavanja i 800 umola / min / mg, nakon prečišćavanja.
Specifična aktivnost je važna mera enzimske čistoće. Različite serije čistog enzima trebale bi imati iste vrijednosti i čak razređivanje enzimskog rješenja će mnogo puta imati identične specifične vrijednosti aktivnosti iako će biti različitih vrijednosti enzimske aktivnosti. To je zato što se kod izračunavanja specifične aktivnosti brojčanika (jedinice / ml) i imenitelj (mg / ml) podjednako pogađaju.
Specifična aktivnost je veoma različita od aktivnosti, ali izračunavanje specifične aktivnosti i dalje zavisi od vrednosti aktivnosti. To znači da će navedena specifična vrednost aktivnosti zavisiti i od definicije enzimske jedinice.
Komadi enzima koji imaju nižu od očekivane specifične vrijednosti aktivnosti mogu sadržati enzimske molekule koji su postali izmenjeni ili mješani sa nečistoćama.
Faktori koji utiču na aktivnost enzima
Moguće je da jedan enzim može imati različite izmerene vrednosti aktivnosti kada se mjeri u različitim laboratorijama (tj. Stvarne razlike u merenoj aktivnosti, a ne očigledne razlike uzrokovane korištenjem različitih definicija jedinice).
Na koji način se vrši analiza (metod testiranja za određivanje čistoće enzima) uticati će na procijenjene vrijednosti aktivnosti. Na primer, enzimi su uglavnom aktivniji između temperatura od 37 stepeni Celzijusa u poređenju sa 20 stepeni Celzijusa, tako da ako se test izvede na 21 stepeni Celzijusa, vrednosti će se razlikovati od ispitivanja izvedenih na temperaturi od 32 stepeni Celzijusa , testovi se izvode na temperaturi između 20-37 stepeni Celzijusa).
Prema tome, definicija enzimske jedinice bi se bolje izrazila kao 1 jedinica (U) količina enzima koja katalizuje reakciju 1 nmol supstrata u minuti u standardnim uslovima.