Takođe se naziva RFLP analiza, tehnika koristi polimorfizme u genetičkim kodovima pojedinačnih ljudi. Iako svi članovi neke vrste imaju suštinski istu genetsku šminku, ove male razlike uzimaju u obzir varijacije u fenotipu, kao što su izgled ili metabolizam, između pojedinaca.
RFLP: Tehnika analize i primene
RFLP analiza uključuje sečenje određenog regiona DNK sa poznatom varijabilnošću, sa restrikcionim enzimima, zatim separiranje fragmenata DNK elektroforezom agaroznog gela i određivanje broja fragmenata i relativnih veličina.
Restrikcijski enzim je enzim, proteinski molekul, koji smanjuje DNK na mestima restrikcije. U suštini, uzorak DNK je razbijen i digestiran od strane enzima restrikcije. Rezultujući fragmenti su razdvojeni prema njihovim dužinama, a obrasci veličine fragmenta će se razlikovati za svaki testirani pojedinac.
Puni proces RFLP zahteva obeležavanje sonde, fragmentaciju DNK, elektroforezu, blotovanje, hibridizaciju, pranje i autoradiografiju. Otkriveni RFLP se vizualizuje korišćenjem rendgenskog filma u autoradiografiji, gde se fragmenti DNK mogu posmatrati i analizirati nakon što se odvoje jedan od drugog elektroforezom.
Neke od aplikacija za RFLP analizu uključuju:
- DNK otisak prstiju . Forenzički naučnici mogu da koriste RFLP analizu kako bi identifikovali osumnjičene na osnovu uzoraka dokaza prikupljenih na sceni zločina.
- Otac. RFLP se takođe koristi u određivanju očinstva ili za traganje predaka.
- Genetička raznolikost. Tehnika se može koristiti u proučavanju evolucije i migracije divljih životinja, proučavanju uzgoja u populaciji životinja i otkrivanju i dijagnozi određenih bolesti.
Tehnika korišćenja RFLP detekcije varijacija u genome je vitalno sredstvo za mapiranje genoma i analizu genetskih bolesti. Ako se lokacija određenog gena za bolest traži u određenom hromozomu, istraživači će analizirati DNK članova porodice sa bolestima, zatim potražiti slične obrasce nasleđivanja u RFLP alelima.
Jednom kada je gen za bolest lokalizovan, sprovođenje RFLP analize na drugim članovima porodice može otkriti nosač mutiranih gena ili signalizirati ukupni rizik od oboljenja. Važno je napomenuti da tehnika RFLP-a nije široko rasprostranjena sada kada se koriste nove robusne tehnike za analizu DNK u forenzičkoj nauci i nekoliko drugih oblasti.
Negativan aspekt analize
Nažalost, tehnika RFLP analize je dosadna i spora. Pored toga što zahtijeva veliku količinu uzorka DNK - uzorak bi obično trebao biti oko veličine četvrtine, koja je relativno velika za uzorke DNK - proces, od oznake sonde do pranja i autoradiografije, može potrajati do ceo mesec da se završi.
Rezultati projekta Human Genome su prilično zamijenili potrebu za RFLP. Projekat je omogućio određivanje celokupne sekvence DNK koja se nalazi u ljudskim ćelijama, ljudskom genomu i za identifikaciju svih gena u ljudskom genomu.