Kako zamrziti-sušiti bakterijsku kulturu (liofilizacija)

Liofilizacija ili sušenje sa zamrzavanjem je kratka laboratorijska procedura

Sušenje sa zamrzavanjem, takođe poznato kao liofilizacija ili kriodizikacija, je proces uklanjanja vode iz proizvoda nakon zamrzavanja (a zatim se stavlja pod vakuum), omogućavajući da se led izmeni od čvrste materije do pare, bez prolaza kroz tečnu fazu. Led (ili drugi zamrznuti rastvarači) se uklanjaju iz proizvoda kroz proces sublimacije i uklanjaju se vezani vodeni molekuli kroz proces desorpcije.

Osnove liofilizacije

Jedan od najboljih načina za čuvanje bakterijske, gljivične, kvasne ili druge kulture mikroorganizma tokom dužeg vremenskog perioda jeste korišćenje procesa sušenja sa zamrzavanjem. Ova kratka laboratorijska procedura može se preduzeti bilo kojim komercijalno dostupnim zamrzivačem koji će očuvati kolekciju kulture. Pošto je liofilizacija najkompleksniji i skupi oblik sušenja, proces se obično ograničava na delikatne, toplotno osjetljive materijale visoke vrijednosti. Supstance koje nisu oštećene zamrzavanjem obično mogu biti liofilizovane, tako da je odlaganje u frižideru nepotrebno.

Ovaj proces može trajati samo tri sata i do 24 sata, ne uključujući vreme kulture.

Korak po korak koraka liofilizacije

1. Prvo, razvijamo kulturu preko noći ili travnjak mikroorganizma na LB ili drugoj odgovarajućoj pločici agar za hranu.

2. Zatim, pripremite sterilne bočice sa crimp-cap sa autoklaviranjem unapred, sa kapicama (gumeni čepovi) postavljeni labavo na vrh. Postavite papirne etikete odštampane identifikacijom kulture unutar cevi pre autoklaviranja. Alternativno, koristite cevi sa kačketima namenjenim za sterilnost .

1. Dodajte 4 ml liofilizacionog pufera na ploču. Ako je potrebno, ćelije se mogu suspendovati pomoću sterilnog stakla.

2. Brzo prenesite suspenziju kulture u sterilisane bočice. Dodati približno 1,5 ml po bočici. Zaptivajte gumenim poklopcem.

3. Zamrznite suspenziju kulture unutar bočica postavljanjem bočica u zamrzivač -20 stepeni Celzius.

1. Kada se kultura zamrzne, pripremite zamrzivač tako što ćete ga uključiti i omogućiti vrijeme za stabilizaciju odgovarajuće temperature i usisavanja. Uradite to u skladu sa uputstvima proizvođača za određeni brend sušare za sušenje veša koje koristite.

2. Pažljivo i aseptično postavite poklopce bočice na vrhu bočica, tako da se u toku procesa sušenja sa smrzavanjem može izbegavati vlaga i postaviti bočice u komoru za zamrzavanje. Vakuum nanesite na komoru u skladu sa uputstvima proizvođača.

3. Dozvolite kulturnom vremenu da potpuno liofilizuje (osuši). Ovo može trajati od nekoliko sati do noći u zavisnosti od količine svakog uzorka i koliko uzoraka imate.

4. Uklonite uzorke iz komore za zamrzavanje u skladu sa uputstvima proizvođača i odmah zaptivite bočice sa gumenim kačketom, a onda vrhove za crimpovanje.

5. Skladištiti liofilizovanu kolekciju kulture na sobnoj temperaturi.

Proizvodi će vam biti potrebni

• Fen za sušenje veša
• Hranljive ili druge odgovarajuće agarske ploče (i inkubator za kulturu)
• Stakleni štap
• Bufer za liofilizaciju
• Bočice sa gumenim vrhom sa gumiranim zatvaračima (i zglobom za nanošenje kapica)
• Zamrzivač

<sub>Referenca:

SP Scientific. Osnovni principi sušenja bez zamrzavanja. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>